CXO_OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP

生效日期

日期：2007.10.24 日期：2007.11.15

审 核：邹强 生效日期：2007.12.01

日 期：2007.11.07 签 字：

制定（变更）原因及目的：

01 2007.12.01 开始按SOP管理 02 03 抄送

分子生物学 [ ]份 SPF级动物 [ ]份

组织病理学 [ ]份 精密仪器室 [ ]份

细胞培养室 [ 1 ]份 准 备 室 [ ]份

天然产物 [ ]份 技术档案室 [ 1 ]份

OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP

1 2

适用范围

¾ 本SOP适用于OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜的使用及维护保养。

职责

¾ 操作人员：认真执行本SOP的内容，并作好相关记录。

¾ 设备管理员：培训、指导操作人员正确执行本SOP，同时需按本SOP对设备进行定期维护保养

并作好相应记录。 主要性能参数 显微镜镜体

物镜转换器 聚焦

六孔，带有简易防水装置

行程9mm（从载物台表面起，向上7mm，向下2mm），同轴粗/微调节钮（微调精度1μm，微调每圈行程100μm），上限位锁定机构，粗调扭力矩调节器上光口，更换内置1×/1.6×变倍器

光路选择钮，透射光强调节钮和灯开关，TTL脉冲控制钮。

照明支柱倾斜装置（30度倾角，带有减震装置）；聚光镜架

（行程50mm，带有摆动装置）；可调视场光阑，4个滤色片架（直径45毫米，厚度=6mm或更小）

3

初始图像光口 前置操作

透射光照明器

100W透射光照明IX2-ILL100 柱

外接电源装置 TH4-200 200V，TH4-HS手动控制器，重量2.2kg

观察筒

双目观察筒 U-BI90 瞳间距调焦范围：50～76mm，带有屈光度调节功能，视场

数22 右手控制旋钮载物台

长工作距离聚光镜

IX2-SFR

行程：50mm（X）×50mm（Y），载物台插入板可更换（直径110mm）

5孔转盘（其中3孔直径30mm，2孔直径38mm），孔径光阑可调，N.A.0.55，W.D.27mm

载物台

聚光镜 IX2-LWUCD

目镜 WHN10×-H 高眼点，带屈光度调节功能，视场数22 反射光荧光装置

荧光照明器 IX2-RFA 直型设计，带有视场光阑模块，有滤色片滑板（2个位置，

直径32mm，厚度或更小） 荧光滤色镜转盘 IX2-RFAC 转盘上有6个位置，内置光闸

第1页/共4页

OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP XB-YQ-10.010.02

光源 100W汞灯室和变压器

4 5 5.1 5.2 5.3

主要应用范围

¾ 透射光明场、透射光相差、反射光荧光显微观察 启动

将光强调节钮调节到最小；

打开显微镜电源，将主开关拨到“I”（开）；

荧光观察时，开荧光汞灯光源，将主开关拨到“I”（开）；

¾ 汞灯是高压激发，其内是高压，切忌频繁开关，可能的话，需观察的样本请集中在一个时间段观

察，在开灯10~15分钟后开始观察效果较好。

¾ 注意：开灯后15分钟内勿关，最好25~30分钟再关闭。

¾ 关闭高压汞灯后，要再次启动，必须等高压汞灯内的水银蒸气冷却下来液化后，才能开启，关灯

后再开灯的间隔时间至少为10分钟，最好为20min以上。

¾ 荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用SHUTTER而不要关闭电源。

¾ 当电源上的计时器到200小时以后，汞灯可能出现不稳定，如开电源后需要很长时间灯才亮，或

者观察时发现光线忽然强忽然弱，这时需要更换汞灯。请通知相关技术人员。6 观察

6.1

转动荧光分光镜组件转盘选择光路。

¾ 透射光观察时，转动未装激发块的荧光转盘部位进入光路，使透射光接入光路。¾ 根据样品的荧光指示剂选择与之匹配的荧光组件（荧光转盘）。荧光转盘的选择：在物镜下方的

荧光转盘里装有不同的滤色块，对应的标记在机架前方可以看见，针对不一样的荧光染料选用不一样的滤色镜块。NIBA：蓝色激发/绿色荧光（例：FITC、EGFP等）；WIG ：绿色激发光（例：Rhodamine、DsRed等）。 6.2 选择放大倍率，拉出变倍钮放大倍率1.6X，推进变倍钮放大倍率为1X。

6.3

选择滤色片：

¾ 在出光口有4个滤色片，包括2个光强调节滤色片（ND25/6，透过率25%/6%差滤色片，1个毛玻璃，其中毛玻璃一直选用，当光强比较强的时候，可以选择不同的光强调节滤色片来减弱，在做相差观察的时候可以选择绿色滤色片（可以增加反差效果）¾ 荧光观察时，使用高倍物镜长时间观察，会发生荧光衰减，导致荧光图像反差减弱，这时可以选

择ND滤色片减少激发光强（本机现在无配备）。 6.4 光路转换，用相差环选择（观察）光路。做明场观察的时候选用BF（旋转转盘来选择）观察的时候，低倍物镜选择PHL，10~20倍的时候选择PH1，40倍选择PH2。6.5 利用X轴Y轴调节钮调节样品位置； 6.6 调节物镜转换器选择放大倍数；

6.7

样品聚焦：

¾ 调节粗/微调焦旋钮 ¾ 调节光强调节钮 ¾ 调节双目观察筒 ¾ 调节瞳间距

¾ 调节屈光度。转动左目镜筒上的屈光度调节环，直到视场周边区域清晰可见。6.8

调节视场光阑。左右拨动视场光阑杆，关闭或打开视场光阑，“O”（开）。

第2页/共4页

/红色荧个绿色单色反

，在做相差 ），1。 OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP XB-YQ-10.010.02 ¾ 视场光阑用于根据所用物镜调节照明光束直径。为了屏蔽散射光，获得良好的图像反差，请将视

场光阑调节于外切于视场。观察活细胞或荧光样品时，为了防止样品损伤或褪色，关小视场光阑是有效的。 6.9

调节孔径光阑。孔径光阑可调节观察图像的亮度、对比度、反差和分辨率。

¾ 一般来说，对于染色样品，将孔径光阑调节到物镜数值孔径的70％-80％时，可能是最佳观察位

置。

¾ 对于不染色细菌样品，根据需要，将孔径光阑向关方向转动。

6.10 关机

6.10.1 先将将光强调节钮调节到最小，再将显微镜主电源开关拨到“O”（关）。 6.10.2 荧光观察时，关荧光汞灯光源，将主开关拨到“O”（关）；

¾ 注意：开灯后¾ 荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用6.10.3 等待仪器（尤其是光源部分：汞灯、卤素灯）冷却后再盖上防尘罩。7 注意事项

7.1 使用完显微镜时，一定要把主开关拨到“7.2 明场相差观察时，请不要开荧光电源，荧光观察后请在登记本上记录荧光电源使用时间。7.3 荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用7.4 开/关显微镜电源前，请首先将亮度开关调至最低。7.5

在做荧光观察的时候，灼伤。而且咖啡色遮光板能够将部分激发光遮住，只留必要数量的激发光，能够起到减少激发光强度的作用。 8 维护保养

8.1 显微镜避免直射、高温、高湿、多尘。8.2 使用完毕，等待仪器（尤其是光源部分：汞灯、卤素灯）冷却后再盖上防尘罩。8.3

本室显微镜为专人定期维护，吹净。如果外露光学部分如目镜、物镜和聚光镜被灰尘等污染，需要用擦镜液（酒精70％）擦拭干净。塑料表面勿用酒精乙醚混合液，镜片表面禁用干镜头纸擦拭。8.4 物镜不可随意拆卸，且防震防摔。8.5 使用完显微镜后，请将各功能部件复位。8.6 为了保护汞灯、延长其使用寿命，其开、关间隔时间最好不要少于要重新开机，必须等约8.7 不要用手强行扳动显微镜电动部件，8.8 尽量不要用手直接触摸显微镜光学部件（如目镜、物镜、聚光镜等的镜面）8.9

荧光观察时，使用高强度的激发光，样品的荧光容易发生衰减，首先应使用光的强度，如果没有关得太小，不要把孔径光阑当作光阑使用。9

示意图

分钟内勿关，最好在观察筒前方的咖啡色挡板请不要拆下，20ND滤色片，就减小孔径光阑，也可以起到相同的作用。但是不要把孔径光阑25~30分钟再关闭。

SHUTTER而不要关闭电源。O”（关）。

SHUTTER而不要关闭电源。

以防在做紫外观察的时候被紫外线

用力要轻， 第3页/共4页

如有杂物可以用吸耳球30分钟。汞灯关闭后，如果需遇到阻力时不要强行调节。。

ND 30％：乙醚15

请不要随意用酒精等有机溶剂擦拭仪器部件， 分钟汞灯冷却后，再打开汞灯电源。调节显微镜手动部件时， 滤色片以减少激发 OLYMPUS IX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP XB-YQ-10.010.02

屈光度调节环 10 相关文件 11 参考文献 12

视场光阑杆 滤色片座 透射光卤灯室 聚光镜 孔径光阑杆 光路选择环 反射光汞灯室 物镜转换器 荧光分光镜组件 X轴Y轴调节钮变倍钮 粗/微调焦旋钮 第4页/共4页