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蜜环菌浓缩液生产工艺

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蜜环菌浓缩液生产工艺

1、 菌种培养

1.1、 母种(试管种)培养

取蜜环菌Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel.保藏菌株,用PDA培养基(马铃薯200g煮熟过滤,蔗糖20g,硫酸镁0.75g,磷酸二氢钾0.75g,琼脂20g,配置1000ml)培养。

灭菌条件:110℃,0.1MP,灭菌30分钟。

培养温度26-28℃,培养周期7-10天。

1.2、 摇床扩大培养(液体菌种培养)

取培养好的母种(试管种),转接于三角瓶液体摇床培养,培养基为PDA培养基不加琼脂,500 ml三角瓶装量250-300ml。接种(母种)后于摇床上110n/m振荡培养。

灭菌条件:110℃,0.1MP,灭菌30分钟。

培养温度26-28℃,培养周期3-4天。

1.3、种子罐培养

培养好的三角瓶液体菌种转接于种子罐进行发酵培养,培养基同液体菌种培养基。

灭菌条件:110℃,0.1MP,2小时。

培养温度26-28℃,培养周期4-6天。

1.4、发酵

培养基:麦麸200 g,玉米粉10 g,蔗糖20 g,酵母粉10 g,水1000 g。

将60%体积的培养基置发酵罐中,灭菌,将种子罐菌种转接于发酵罐内进行发酵培养,待发酵液变为紫褐色,由稠变稀,部分菌丝开始自溶,菌丝颗粒变碎,pH值降至5.2—5.6,罐内亮度开始减弱,即可出罐。

灭菌条件:121℃,0.1MP,2小时。

培养温度26-28℃,培养周期6-7天。

2、 滤过

培养好的发酵液,板框压滤。

3、 浓缩

将上述滤液置真空减压浓缩罐内,减压浓缩至相对密度1.18(20℃)。

4、 检验。

4.1 性状 本品为棕褐色粘稠液体,味微酸、苦、微甜。(无发酵变质、长霉等现象)

4.2 鉴别

4.2.1 取本品2.0ml,加甲醇10ml,密塞,时时振摇,浸渍1小时,滤过,照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述溶液5μl,点样于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇一乙酸乙酯(4:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在110℃烘约10分钟,立即检视,应有蓝色斑点。

4.2.2 取本品约1.0ml,加水10ml,在水浴中加热溶解,过滤,取滤液2ml,加5%α-萘酚乙醇液数滴,摇匀,沿壁加入浓硫酸1ml,在两液面交界处即显紫红色环。

4.3 检查 相对密度 本品的相对密度(中国药典2010年版一部附录Ⅵ A)应不低于1.15(20℃)。

5、 包装。

洁净塑料桶包装,规格:25kg/桶。

密环菌浓缩液工艺流程

培养基的配置→灭菌→接种→发酵培养→发酵菌丝体→

浸泡→过滤→真空浓缩→浓缩液

排渣

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