慢病毒载体研究进展

第２１卷第３期　西昌学院学报・自然科学版　Ｖｏ１．２１，ＮＯ．３　２００７年９月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｃｈａｎｇ　Ｃｏｌｌｅｇｅ・Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　Ｓｅｐ．，２００７　慢病毒载体研究进展　彭　徐　（西昌学院，四川　西昌６１５０１３）　【摘　要】慢病毒作为一种特殊的逆转录病毒，与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较，具有可　感染细胞及非细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点，　已成为当前基因治疗和转基因动物中载体研究的热点。近年来对其基础生物学特性、载体改造及其应用等　研究均取得了较大进展。本文就慢病毒载体及应用方面的研究进展作一综述。　【关键词】慢病毒载体；基因治疗；转基因动物　【中图分类号】Ｑ７８２　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７３．１８９１（２００７）０３．００２０．０５　慢病毒（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）属于逆转录病毒科　间有两个重要序列：一个是二聚物连接位点（ＤＬＳ），　（Ｒｅｔｒｏｖｉｄａｅ），为ＲＮＡ病毒。由于这类病毒的一个重　另一个是包装信号　。后者可指导基因组ＲＮＡ包装　要特点是病毒粒子中含有依赖ＲＮＡ的多聚酶即逆　入病毒颗粒中。ＲＮＡ分子两端为ｕ３、Ｒ和ｕ５构成　转录酶，故现名为逆转录病毒。慢病毒是一类重要的　的长末端重复序列（ＬＴＲ），其中含有启动子、增强　逆转录病毒，如人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）和猴免疫缺陷　子、起始信号、延伸信号等，还包含与前病毒整合有　病毒（ＳＩＶ）等。慢病毒除了具有一般逆转录病毒ｇａｇ、　关的转座子样元件。元件如此集中于ＬＴＲ为本　ｐｏｌ和ｅｎｖ　３个基本结构基因外，还包含４个辅助基　病毒的一个明显特征。　因ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｎｅｆ、ｖｐｕ和２个调节基因ｔａｔ和ｒｅｖ［　。慢　１．２慢病毒基因的表达与　病毒载体（Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ　ｖｅｃｔｏｒ，ＬＶ）作为外源基因载体，　慢病毒通过其包膜蛋白识别宿主细胞表面的特　具有其独特的特点和优势，已广泛地用于体外细胞　异性受体蛋白，然后脱掉外面的核衣壳释放出病毒　的转染和基因治疗的研究。　基因组ＲＮＡ进入细胞内，然后在其自身逆转录酶的　作用下，合成ｃＤＮＡ，形成ＤＮＡ—ＲＮＡ杂合体，由　１慢病毒基因组结构及特点［　ｌ　ＲＮａｓｅ　Ｈ水解掉杂交体中的ＲＮＡ，再由宿主细胞的　ＤＮＡ聚合酶以杂交体中的ＤＮＡ单链为模板合成另　１．１慢病毒的基因组　一条与之互补的ＤＮＡ链，形成ＤＮＡ双链，这就是所　慢病毒为二倍体ＲＮＡ病毒，即有两个相同的　谓的前病毒ＤＮＡ。前病毒ＤＮＡ连接成环状结构后　ＲＮＡ分子，在５’端附近经氢键连接成７０Ｓ　ＲＮＡ，它　进入细胞核，然后随机整合到宿主细胞基因组中。整　们的相互作用可能在反转录过程中起调节作用。慢　合进去的前病毒ＤＮＡ会转录出病毒蛋白的ｍＲＮＡ　病毒ＲＮＡ分子具有典型的真核ｍＲＮＡ的结构：一　和病毒基因组ＲＮＡ，二者在宿主细胞的细胞质中包　个甲基化的５’端帽子结构和３’端的聚（Ａ）尾，每个　装成完整的病毒颗粒，并以出芽方式释放到细胞　ＲＮＡ均可以和宿主的ｔＲＮＡ配对，从而为逆转录做　外。被感染后的细胞持续的产生病毒，并不发生细胞　准备。　裂解。在整合过程中，ＬＴＲｓ起着重要的作用，因为只　慢病毒的基因组中一般有３个基本基因：编码　有两端的ＬＴＲｓ通过共价键连接成环状分子才可以　病毒核衣壳蛋白的结构基因ｇａｇ，编码逆转录酶的　整合进去。　基因ｐｏｌ和编码包膜蛋白的基因ｅｎｖ，方向为５’端　一＞３’端。ｇａｇ基因的起始密码子ＡＵＧ与帽子位点　２慢病毒载体　收稿日期：２００７—０５一ｏ６　作者简介：彭徐（１９６４一　），男，西昌学院副院长，副教授，主要从事生物学、生态学、环境教育的教学与科研。　维普资讯 http://www.cqvip.com 第３期　２．１发展背景　彭徐：慢病毒载体研究进展　・２１・　重组病毒颗粒，该病毒颗粒只能去感染并整合宿主　大多逆转录病毒载体通过病毒两端的特殊序列　在逆转录时整合到细胞，这一过程依赖有丝分　裂的核裂开，使逆转录前整合复合体转位到核上。　但是，逆转录病毒载体只能感染期细胞，容纳外　源基因的ＤＮＡ片段长度不超过８ｋｂ；而腺病毒载体　感染细胞时，病毒ＤＮＡ游离在细胞核内，并不整合　到染色体上，在体内不能实现稳定的长期表达，且反　细胞，但不能在宿主细胞内再产生子代病毒，这样增　强了安全性，但是载体与包装前病毒ＤＮＡ的简单重　组可能会产生野生型病毒。基于以上不足，将ｇａｇ、　ｐｏｌ及ｅｎｖ基因分别组装在两个质粒之中，即一个表　达ｇａｇ和ｐｏｌ、另一个表达ｅｎｖ，其基因组都不含包装　信号　、ＬＴＲ等。根据这个原理，Ｎａｌｄｉｎｉ和Ｋａｆｒｉ等构　建了三质粒表达系统。这样的包装系细胞几乎就排　复应用容易引起免疫反应。不仅如此，逆转录病毒　载体转染动物胚胎的早期，产生延迟的整合，产生不　同组织和不同位点的镶嵌体。　这些非慢病毒的逆转录病毒载体对不的静　止细胞不感染和表达沉默　等缺陷难以克服，所以　应用不十分广泛。近些年发展的慢病毒载体克服了　这些缺陷，可以感染非期细胞。此外，慢病毒载　体容纳外源性目的基因的片段大，可以在体内较长　期的表达，免疫反应小，安全性较好。人们已成功地　应用慢病毒载体感染了神经细胞、肝细胞、造血干细　胞、胰岛细胞、肌肉细胞、视网膜色素上皮细胞、气道　上皮细胞等。随着分子病毒学研究的不断深入，人　们对慢病毒的分子生物学特性有了更为深刻的了　解，不仅在基因治疗方面显示出优越特性，而且在转　基因动物制备方面发挥出优势。　２．２慢病毒载体构建的原理　慢病毒基因组结构复杂，除ｇａｇ、ｐｏｌ和ｅｎｖ这３　个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外，还包括４　个辅助基因，ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｎｅｆ、ｖｐｕ和２个调节基因ｔａｔ和　ｌ－ｅＶ。构建慢病毒载体的构建首先要考虑的是病毒载　体的安全性。慢性病毒载体的构建要尽可能的去除　反式功能基因序列，以外源基因来代之，并保留或部　分保留病毒本身的ＬＴＲ以及病毒的包装信号　。由　于这种载体已经缺少形成完整病毒所需要的蛋白基　因，所以它不能依靠自身基因形成完整的病毒颗　粒。由于重组病毒是缺陷型的，它必须在辅助病毒　存在下才能复制，辅助病毒本身并不增殖，但具有感　染力而给复制缺陷型的病毒提供增殖必须物，所以　在收获的病毒液中既含有载体病毒又含有辅助病　毒。包装细胞系便解决了以上这些问题，包装细胞　可以提供缺陷型的病毒所需要的各种蛋白，带有目　的基因的重组慢性病毒载体转染包装细胞，虽然自　身不能表达所必须的病毒蛋白，但是此载体含有完　整的包装信号，在包装细胞提供包装蛋白的情况下，　可以包装成缺少病毒ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ蛋白编码基因的　除了由于重组而产生野生性病毒的可能性。　目前使用不同种属来源的ＬＶ载体包括来源于　人类（ＨＩＶ—ｌ和ＨＩＶ一２）、猿猴（ＳＩＶ）、猫（ｎＶ）或　牛（ＢＩＶ）的免疫缺陷病毒以及山羊关节炎一脑炎病　毒（ＣＡＥＶ），马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）和牛Ｊｅｍ—　ｂｒａｎａ病病毒（ＪＤＶ）等。　２．３慢病毒载体的制备　以ＨＩＶ为例，携带目的基因的重组病毒的制备　多采用瞬时转染系统（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｓｖｓｔｅｒｎ），　并且是３个质粒共转染一个细胞系，一种质粒是含　目的基因及感染靶细胞所必需的反式作用序列；另　一种质粒提供包装功能，如表达结构基因及各种产　生病毒颗粒酶类；第三种质粒是含非ＨＩＶ来源的包　膜蛋白（ｅｎｖ）基因质粒，常用的ｅｎｖ是编码ＶＳＶ２Ｇ　的基因。进一步的研究，Ｍｉｙｏｓｈｉ　Ｈ等＂　构建了一种　慢病毒和腺病毒的杂交载体。该载体包括含有ＧＦＰ　的自我失活的慢病毒载体、ＨＩＶ来源的ｇａｇ／ｐｏｌ／　ｒｅｖ表达基因盒、四环素诱导的腺病毒包膜基因盒、　反向的四环素转录激活因子和辅助性腺病毒主　体序列。该载体具有腺病毒的高效转基因频率和慢　病毒的稳定整合效率的优点。此外，它避免了多个质　粒共转染而制备所带来的不利，而可控的基因表达　增加了它的安全性。　２．４慢病毒载体的类型　】　２．４．１内启动子载体（ＶＩＰ）　该类型载体的目的基因的表达可由外源启动子　来启动，这样可以灵活的去选择合适的启动子来表　达目的基因。载体５’端ＬＴＲ下游的标志基因可由病　毒的内部启动子来控制，而下游插入的目的基因的　表达则由外源启动子来控制，由于目的基因的表达　由外源启动子来驱动的，从而增加了选择性，可以保　证目的基因能够在特定的组织或细胞内特异性的表　达。　它可以插入两个外源基因，一个置换ｇａｇ、ｐ０１基　因，由不剪接的ＲＮＡ来表达；另一个置换ｅｎｖ基因，　维普资讯 http://www.cqvip.com

・２２・　西昌学院学报・自然科学版　第２１卷　由剪接的ＲＮＡ来表达，这种载体中的目的基因的表　达由病毒ＬＴＲ中的启动子来驱动，是依赖于病毒　ＲＮＡ的有效表达。但该种载体只能在病毒启动子有　活性的细胞中进行表达，故有一定的使用局限性。　鉴于以上的不足，有人构建一种以外源启动子来驱　动两个外源基因，克服了以上的不足。　血系统、视网膜等，并且不会引发明显的免疫反应。　３．１．１慢病毒载体在心血管系统疾病治疗中的应用　Ｚｈａｏ等研究利用慢病毒载体转染新生儿和成　年人心脏细胞，通过直接注入心脏。研究结果首次表　明，慢病毒来源的载体能够成功的在体内和体外转　染心肌，慢病毒载体在心血管系统疾病研究中成为　２．４．２自我灭活性载体（ＳＩＮ）　该种载体可以自我灭活故又可称为一次性载　体，在它的３’端ＬＴＲ中的Ｕ区域有一段２９９ｂｐ的缺　失，它包括启动子、增强子以及激活癌基因的相关序　重要的基因传送载体。结果显示基因在体内能够有　效的转入新生儿和成人心肌细胞，经鉴定证实培养　细胞中，新生儿１００％和成人７０％心肌细胞有报告　基因表达。　列，余下的３’端的Ｕ区域是子代前病毒Ｕ区的模　板，载体病毒感染宿主细胞后，３’端的ＬＴＲ的缺失　就转移到子代前病毒的５’端的相应ＬＴＲ部位。由于　重组病毒两端的ＬＴＲ存在缺失，在整合时就不会激　活癌基因了，这种缺失导致病毒基因组ＲＮＡ得不到　相应的ＬＴＲ中的启动子的驱动。因此，整合到宿主　基因组中的前病毒不能转录出病毒基因组ＲＮＡ，所　以不能再复制下一代病毒，该种病毒只可感染但不　３．１．２病毒载体在血液系统疾病治疗中的应用　镰状细胞贫血（ＳＣＤ）　Ｐａｗｌｉｕｋ等构建的［ＳＡ珠蛋白基因变体［ＳＡ—　Ｔ８７Ｑ能阻止ＨｂＳ的多聚化，以ＨＩＶ—ｌ载体将该基　因转染人造血干细胞，可以表达。在ＳＣＤ小鼠模型，　移植后转基因获得长期表达（可达到ｌＯ个月），在循　环血中９９％的红细胞及５２％的血红蛋白有红系特　异性转基因表达。在两个ＳＣＤ小鼠模型Ｂｅｒｋｅｌｅｙ和　可进一步复制扩散，进而增强了其安全性。并且该　种载体中的插入基因是由外源启动子来驱动的，不　依赖于ＬＴＲ中的启动子。　ＳＡＤ中，红细胞脱水及镰状变得到改善，血液学指　标、脾脏肿大及特征性尿浓缩功能缺陷得到纠正。　Ｂ一地中海贫血　，　２．４．３可经四环素的载体　１９９６年Ｐｍｌｌｕｓ等构建了逆转录病毒的四环素　Ｍａｙ等构建含人８珠蛋白启动子及增强子　的人Ｂ珠蛋白基因的ＨＩＶ—ｌ载体，在载体白血病　Ｂｉａｇｉ等将急性髓细胞性白血病（ＡＭＬ）及急性　系统（ＲｅｖＴｅｔ　ｓｙｓｔｅｍ），该系统可在四环素及其　衍生物作用下诱导目的基因的表达，因其载体是逆　转录病毒，与用质粒作为载体的Ｔｅｔ系统相比，具有　严格、高水平表达的特性。这样的载体可经四　环素及其衍生物定量表达目的基因。　淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的原代白血病细胞作为靶细　胞，以携带ＧＦＰ标记基因的ＨＩＶ一１载体转染靶细　胞，转染率分别为８．４％－－３－７．Ｏ％和４．４％　％。结果　提示基因工程的白血病细胞可以作为细胞性瘤苗进　行免疫治疗。　除此之外，ＬＶ还可以用于Ｆａｎｃｏｎｉ贫血和血友　３慢病毒载体的应用　由于慢性病毒的高感染率和与细胞染色体整合　而不发生基因重排。并且具有高效整合、高效转录、　高效表达和宿主范围广的特点，因此它是真核系统　基因转移的有力工具，常用于人类疾病的基因治疗、　病等的基因治疗。　３．１．３慢病毒载体在肝脏疾病治疗中的应用　基因疗法是治疗肝脏疾病的有效方法。Ｎｇｕｙｅｎ　等证实了来源于第三代人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ一　１）能够在完全缺乏细胞的情况下有效的控制传　表达外源基因、确定基因的结构和功能、进行发育生　物学的研究、癌变模型研究等。　３．１基因治疗伸Ｉ１　，　，　。　递、整合、稳定表达转基因进入人原代肝细胞。研究　显示啮齿动物肝细胞有很高程度抵抗ＨＩＶ载体介　导转染，这种显型显著的表现在鼠科动物肝细胞，并　基因治疗的主要途径就是把目的基因导入靶细　胞。慢性病毒不仅可以整合到宿主染色体中并稳定　的持续表达目的基因，再加上它对期和非　期的细胞都可以进行感染，可以较容易的感染一些　且直接引起早期传染病。结果提示治疗肝脏疾病通　过移植遗传修改的肝细胞，可用于一定数量的遗传　性和获得性肝功能失调。　用其他载体较难进行转基因的组织：脑、肺、肝脏、造　３．１．４慢病毒载体在关节炎疾病治疗中的应用　关节炎是普遍的炎性血管性疾病，它可引起正　维普资讯 http://www.cqvip.com

第３期　彭徐：慢病毒载体研究进展　・２３・　面的炎性和正面的血管性细胞素如肿瘤坏死因子　高，对宿主细胞功能系统有良好的适应性。该载体在　医学，农牧业等方面都产生了重要的意义。２００２年　Ｌｏｉｓ等试用于转基因大鼠和小鼠的制备，并获得了　（ＴＮＦ）。Ｙｉｎ等为了评估抗血管因子内皮他丁ＴＮＦ　诱导的炎性关节炎，在转基因鼠发病之前，将内皮他　丁表达慢病毒载体的人肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）直接注　射人关节腔。注射后８周，组织学分析显示，内皮他　丁减少血管密度、谓膜组织、关节炎发生总平均数，　成功。Ｈｏｆｍａｎｎ等使用ＬＶ—ＰＧＫ转移外源基因到猪　和牛胚胎获得初步成功。Ｈａｍｒａ等用ＬＶ—ＥＧＦＰ转　染体外培养的精原细胞，然后将整合有ＬＶ—ＥＧＦＰ　的精原细胞移植到化学杀死精原细胞的野生型雄性　大鼠睾丸，移植后大约６０天，与相当年龄的雌性大　体内、体外检查显示潜在机制内上皮他丁抑制，关节　炎显示内皮他丁阻断了肿瘤坏死因子诱导的激活　ＪＮＫ和ＪＮＫ依赖的前一血管基因表达。研究提出了　新的机制通过内皮他丁抑制血管炎，并证实了抗血　管基因疗法治疗炎性关节炎的潜在效用。　３．１．５慢病毒载体在恶性黑色素瘤疾病治疗中的应　用［１９１　树枝状细胞是最有力的专业免疫反应细胞，在　早期免疫反应中起着至关重要的作用，引导基因进　入树枝状细胞将允许编码蛋白结构表达，因此，延长　了免疫抗原的表达。ｍｅｔｈａｒｏｍ等的研究提示以ＨＩＶ　一１为基础的慢病毒载体能有效的将基因转入树枝　状细胞，结果七只肿瘤小鼠模型中，有四只经治疗后　生存期延长至８０天，结果提示ｍＴＲＰ一２转染的树　枝状细胞，提供了恶性黑色素瘤潜在的治疗手段，尤　其是在该病的早期阶段。　３．１．６慢病毒载体在中枢系统疾病治疗中的应用　帕金森氏病是神经系统疾病，其特点是进行性　缺失黑质多巴胺神经元，通过多巴胺代替缺失的神　经递质改善症状，在早期阶段的治疗是有效的。Ｚｕｒｎ　等利用两种截然不同的基因方法释放神经变性分子　胶质细胞来源的神经营养因子（ＧＤＮＦ）在疾病动物　模型；（１）囊状的遗传工程细胞系释放ＧＤＮＦ（不包　括体外基因治疗）；（２）慢病毒编码的ＧＤＮＦ基因（在　活体内基因治疗）。两种方法均起到保护黑质多巴　胺能神经元对抗细胞死亡引起的损害，在啮齿类和　猴子帕金森氏病模型中，神经症状明显减轻。　３．１．７慢病毒载体在人体代谢系统疾病中的应用　Ｇａｌ－ｌｉｃｈａｎ等利用人免疫缺陷病毒来源的慢　病毒载体，能够稳定的转染整个胰岛，在移植后３０　天，体内、体外均可观察到外源报告基因表达。结果　提示ＨＩＶ来源的慢病毒载体能够有效的转染治疗　基因分子密码至胰岛细胞，从而治疗糖尿病。　３．２转基因动物¨，６＇　１　慢性病毒载体技术是目前转基因中最有效和最　成功的方法，其技术操作简便，能高效地将目的基因　以单拷贝的形式插入宿主染色体中，基因表达效率　鼠交配，获得４４只子代大鼠，其中有２６只来自移植　精子干细胞克隆，１３只携带慢病毒转基因，大约　３０％转基因阳性。说明ＬＶ可整合到精原细胞ＤＮＡ　上经自然交配制备转基因动物。Ｐｆｅｉｆｅｒ等用携带　ＣＡＧ和ＰＧＫ启动子ＧＦＰ与ＬａｃＺ的ＬＶ转染小　鼠ＥＳ细胞，转移的基因能在未分化ＥＳ细胞增殖期　间稳定地表达，ＥＳ细胞体外或体外分化时都能表达　转移基因，移植这种细胞到小鼠的囊胚，生产的嵌合　体鼠在多种组织中表达外源基因，嵌合鼠交配产生　的胚胎仍能表达外源基因产物。　３．３结合ＲＮＡｉ进行功能基因组研究　１　利用慢病毒载体结合ＲＮＡｉ技术来研究高度分　化细胞和肿瘤细胞中特定基因的遗传功能是功能基　因组研究的又一新的突破。这一结合是利用了慢病　毒载体具有转染非细胞和将目的基因整合到靶　细胞的能力，以及ＲＮＡｉ可以特异地抑制靶基因的　功能。Ｇｕｓｔａｖｏ运用表达ｓｉＧＦＰ（ＧＦＰ　ｓｉＲＮＡ）的慢病　毒载体敲除ＧＦＰ基因。进一步研究表明，用表达　ｓｉＧＦＰ的载体转染ＧＦＰ阳性小鼠的卵细胞，在胚泡　中观察到荧光减弱；更有趣的是，Ｆ２代仍能表达　ｓｉＧＦＰ，并减少了ＧＦＰ的表达。　４慢病毒载体的运用前景及展望　近些年发展的ＬＶ不论从理论上还是实践中都　具有广阔的应用前景。虽然慢病毒载体已经被广泛　地应用到基因治疗、转基因动物和基因功能研究中，　但是仍然存在很多问题，需要人们在以后的工作中　进一步解决。但是以慢病毒作为载体的明显优点是　基因转移效率高，整合率也明显高于其他基因转移　方法；转录病毒生命周期中具有ＤＮＡ阶段，并且基　因组结构简单，便于基因操作；易于分离，重组反转　录病毒感染细胞后不引起细胞病变，并且产生的病　毒粒子以芽生的方式从细胞膜上释放，存在于细胞　的培养上清液中，易与宿主细胞分离，且污染宿主细　维普资讯 http://www.cqvip.com ・２４・　西昌学院学报・自然科学版　第２１卷　胞ＤＮＡ等成分的概率低。对于大型动物的转基因有　载体的体内及体外实验中尚未发现ＲＣＶ的产生，提　很大的诱惑力，可以大幅度地节省制备费用，而且容　示其安全性是有保证的，相信随着技术的进步，该类　易操作，ＬＶ克服了肿瘤性逆转录病毒载体易形成嵌　载体安全性将会得到进一步提高。总之，尽管基因治　合体、表达沉默等不利因素。在安全性方面，国外已　疗进人临床应用尚需时日，但慢病毒载体具有可感　经进行了一系列的从基础到临床的系统研究工作，　染非细胞的特性，在以造血干细胞、肝细胞、神　包括构建有效载体所需的最少的ＨＩＶ～１基因，ＳＩＮ　经细胞、视网膜细胞等低潜能的细胞作为靶细　载体的构建，应用ＨＩＶ一１载体一包装细胞系，非人　胞的基因治疗中，慢病毒载体无疑将有较好的应用　类慢病毒载体的应用等。到目前为止，以Ｈ１Ｖ一１为　前景。　参考文献：　［１】邓继先，沈伟．用慢病毒载备转基因动物的研究进展［Ｊ】．中国生物工程杂志，２００４，２４（９）：１６—１９．　［２】Ｐｆｅｉｆｅｒ　Ｐ，Ｉｋａｗａ　Ｍ，Ｄａｙｎ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓｇｅｎｅｓｉｓ　ｂｙ　ｌｅｎｔｉｖｉｒａ　ｌｖｅｃｔｏｒｓ：ｌａｃｋ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　ｉｎ　ｍａｍｍａｌｉａｎｅ　ｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｐｒｅｉｍｐｌｎａｔａｔｉｏｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００２，９９：２１４０—２１４５．　［３】刘晓影．慢性病毒栽体的最新进展与应用［Ｊ】．中华医学与健康，２００５，２：８９—９１．　［４】徐晓明，杨慧，王晓萍．慢病毒载体的构建及优化［Ｊ】．中国临床康复，２００６，１０（９）：１４７—１４９．　［５】李振宇，徐开林，潘秀英．慢病毒载体的构建及结构优化［Ｊ】．国外医学分子生物学分册，２００２，２４（５）：３１０—３１３．　［６】刘瑞兰．动物基因工程慢病毒载体［Ｊ】．渝西学院学报（自然科学版），２００５，４（２）：５４—５６．　［７】Ｍｉｙｏｓｈｉ　Ｈ，Ｂｌｏｍｅｒ　Ｕ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｆｏ　ａ　ｓｅｌｆ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｌｅｎｔ／ｖｉｒｕｓ　ｖｅｃｔｏｒ．Ｊ．Ｖｉｒｏ１，１９９８，７２：８１５０—　８１５７．　［８】杨玉芳，丁彦青．慢病毒载体与基因治疗［Ｊ】．国外医学病毒学分册，２００３，１０（３）：７８—８１．　［９】伍志坚，黄海金，粱国栋．用于基因治疗的慢病毒载体［Ｊ】．中华实验和临床病毒学杂志，１９９８，１２（２）：１９５—１９８．　［１０】董文吉，祖振响，刘德培．病毒载体与造血干细胞基因治疗［Ｊ】．遗传学报，２００３，３０（４）：３８２—３８７．　［１１】主鸿鹄，徐开林．慢病毒载体的改进及其在血液病基因治疗中的应用［Ｊ】．中国实验血液学杂志，２００３，１１（２）：２０８—　２１２．　［１２】主鸿鹄，徐开林．慢病毒载体及其对低潜能细胞的基因转移［Ｊ】．白血病・淋巴瘤，２００３，１２（１）：６０—６３．　［１３】谢书阳，张敬之，任兆瑞．慢病毒载体与造血干细胞介导的基因治疗［Ｊ】．中国生物工程杂志，２００４，２４（１０）：６—８．　［１４】陈波斌，林果为．慢病毒载体用于人类疾病基因治疗研究的进展［Ｊ】．国外医学输血及血液学分册，２００２，２５（６）：　５５０—５５３．　［１５】张敬之，郭歆冰，谢书阳．用慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）转基因小鼠［Ｊ】．自然科学进展，２００６，１６（５）：　５７１—５７７．　［１６】夏大静，王建莉．病毒载体与以树突状细胞为基础的肿瘤基因治疗［Ｊ】．第二军医大学学报，２００２，２３（１０）：１０７５—　１０７９．　［１７】王坚，蒋雨平．慢病毒载体介导的基因转导治疗帕金森病［Ｊ】．中国临床神经科学，２００４，１２（１）：１０４—１０６．　［１　８］Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．Ａｋｋｉｎａ．ＨＩＶ一１　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｃｏｎｆｅｒｒｅｄ　ｂｙ　ｓｉＲＮＡ　ｃｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＸＣＲ４　ａｎｄ　ＣＣＲ５　ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｂｙ　ａ　ｂｉｓ　ｐｅｃｉｆｉｃ　ｌｅｎｔ／ｖｉｒａｌ　ｖｅｃｔｏｒ．ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ　Ｔｈｅｒ，２００５，１（２）：１．　【１９］Ａｚｚｏｕｚ，Ｍ．Ｌｅ，Ｔ．Ｒ￣Ｉｐｈ，Ｇ．Ｓ．ｅｔ　ａ１．Ｌｅｎｔｌｖｅｃｔｏｒ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ＳＭＮ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ａ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｓｐｉｎａｌ　ｍｕｓｃｕｌａｒ　ａｔｒｏ　ｐｈｙ．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ，２００４，１２（１１４）：２６—３１．　【２０］Ｂａｌａｇｇａｎ，Ｋ．Ｓ．，Ｋ．Ｂｉｎｌｅｙ，ｅｔ　ａ１．ＥＩＡＶ　ｖｅｃｔｏｒ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｏｆ　ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ　ｏｒ　ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｈｙｐｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ＣＮＶ．Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ，２００６，１５（１３）：５３—６５．　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌｅｎｔｕｉｒａｌ　Ｖｅｃｔｏｒ　ＰＥＮＧ　Ｘｕ　（Ｘ／ｃｈａｎｇ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘ／ｃｈａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６１５０１３）　（下转４１页）　维普资讯 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第３期　李翠蓉等：禽流感与防疫　用于禽养殖业。与此同时，我国已经建立了可快速检　目前，我国科研人员通过近五年的艰苦努力，克　服重重技术难关，已成功研制出世界首个禽流感一　测禽流感的技术手段，卫生部强化了包括禽流感在　新城疫重组二联活疫苗，这种一苗可防两病的新疫　内的流感疫情监测，多种流感病毒的动向都在监视　苗已于２００５年１２月２３日正式批准生产储备，并已　视野中。　参考文献：　［１】首都医科大学主编．禽流感防治手册［Ｍ】．北京：北京科学出版社，２００４．　［２】甘盂候主编．禽流感［Ｍ】．北京：农业科学出版社，１９８５．　Ａｖｉａｎ　Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ＬＩ　Ｃｕｉ—ｒｏｎｇ　，ＳＯＮＧ　Ｈｅ　，ＱＵ　Ｏｕ　ｆ　１．Ｘｉｃｈａｎｇ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉｅｈａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６１５０１３；２．Ｃｈｅｎｇｄｕ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｅｎｊｉａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６１１１３０；３．Ｌｉｖｅｓ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｆＪｉｎｙａｎｇ，Ｊｉｎｙａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６１６２５０）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｖｉａｎ　Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｉＳ　ａｎ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｖｉｒｕｓ　Ａ　ｗｈｏｓｅ　ｓｕｂｔｙｐｅｓ（ｉ．ｅ．ｂｉｒｄ　ｆｌｕ　ｖｉｒｕｓ．ｓｕｃｈ　ａｓ　Ｈ５Ｎ１　ａｎｄ　Ｈ９Ｎ２）ｍａｉｎｌｙ　ｉｎｆｅｃｔ　ｂｉｒｄｓ　ｂｕｔ　ｏｃｃａｓｉｏｎａｌｌｙ　ａｆｆｅｃｔ　ｈｕｍａｎｓ．Ｉｔ　ｉＳ　ｃｌａｓｓｉｉｆｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｔｏｐ　ｉｎ—　ｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｂｙ　ＯＩＥ（Ｏｍｃｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｄｅｓ　Ｅｐｉｚｏｏｔｉｅｓ　ｉ．ｅ．ｔｈｅ　Ｗｏｄｄ　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｅａｈｈ）．Ｉｔ　ｉＳ　ｏｆ　ｇｒｅａｔ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｏ　ｈｕｍａｎ　ｈｅａｌｔｈ　ｔｈａｔ　ｐｅｏｐｌｅ　ｋｎｏｗ　ａｎｄ　ｒｅｃ—　ｏｇｎｉｚｅ　ｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ　ｏｆ　ａｖｉａｎ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｖｉｒａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｉｔｓ　ｗａｙｓ　ｏｆ　ｓｐｒｅａｄ　ａｎｄ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ　ａｎｄ　ｈｏｗ　ｔｏ　ｅｘｔｅｒｍｉｎａｔｅ　ｉｔ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｂｏｄｙ　ｂｙ　ｍａｋｉｎｇ　ｖａｃｃｉｎｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｖｉａｎ　Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ；Ｔｈｅ　ｔｏｐ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ；Ｓｐｒｅａｄ；Ｓｙｍｐｔｏｍｓ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ；Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　（责任编辑：张荣萍）　（上接２４页）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｓ　ａ　ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｒｅｔｒｏｖｉｕｒｓ，ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ　ｐｏｓｓｅｓｓ　ｓｅｖｅｒａｌ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｔｈｅ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｄｉｖｉｄｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　Ｕｎｓｅｐａｒａｔｅｄ　Ｃｅｌｌ，ａ　ｌａｒｇｅ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｇｅｎｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔ，ａ　ｌｏｎｇ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｏｓｔ　ａｎｄ　ＳＯ　ｏｎ　ｗｈｅｎ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｕｓｕａｌｌｙ　ｕｓｅｄ　ｖｅｃｔｏｒｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ　ｖｅｃｔｏｒ　ａｎｄ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　ｖｅｃｔｏｒ，ａｎｄ　ｉｔ　ｂｅｃｏｍｅｓ　ｔｏ　ｂｅ　ｔｈｅ　ｈｏｔ　ｓｐｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｅｃｔｏｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｎ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ａｎｉｍａｌｓ．Ｉｔ　ｈａｓ　ｇｏｔ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｂａｓｉｃ　ｂｉｏｎｏｍｉｃｓ，ｖｅｃｔｏｒ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｎｔ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｓｏ　ｉｔ　ｐｒｏｖｉｄｅｓ　ａｎ　ｏｖｅｒｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｒｉ　ｖｅｃｔｏｒ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｒｔｉｃｌｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ　ｖｅｃｔｏｒ；Ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ；Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ａｎｉｍａｌｓ　（责任编辑：张荣萍）