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普洱茶与红茶的抗氧化特性比较研究

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茶叶Journal of Tea 2006,32(4):202 ̄205 普洱茶与红茶的抗氧化特性比较研究 东 方 揭国良 陈 飞何普明 (浙江大学茶学系 杭州 310029) 捅 要 采用氯仿,乙酸乙酯,正丁醇等溶剂,分步萃取普洱茶及红茶水提物。采用化学发光法和可见分光 光度法比较两类茶水提物及萃取组分在水相和油相中的抗氧化性。结果表明:普洱茶在水相中的抗氧化能力无论 在总体或单个组分上均略低于红茶;两类茶水提物对某些油脂具有较好抗氧化性;乙酸乙酯萃取组分对两类茶在 水相中的抗氧化性起主导作用,且红茶略高于普洱茶,在油相中均无表现明显抗氧化性。 关键词 普洱茶;红茶;抗氧化 中图分类号:TS272.5 4;TS272.5 2 文献标识码:A 文章编号:0577--8921(2006)04--2O2一O4 Comparison of the antioxidant activity of pu-erh tea and black tea DONG Fang,JIE Guoliang,CHEN Fei,HE Puming (Department of tea science,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China) Abstract The water・‘extracted pu——erh tea and black tea were separated by the order of chloroform,ethyl acetate,and —butano1.The antioxidant activity of these teas and their fractions were investigated by the hydroxyl radical—induced luminol chemiluminescence assy and visible spectrophotometric method.The results revealed that black tea had slightly stronger antio ̄dant activity than pu—erh tea in water phase.The two types of tea had considerable antioxidant effect on some lipid.The ethyl acetate fraction was the most contributions to the antioxidant activity of the two types of tea in water phase which antioxidant activity was a little stronger from black tea than that from pu—erh tea,and had scarcely any antioxidant activities in oil phase. . Key words Pu—erh tea;black tea;antioxidant activity l 前 言 经被钝化,以致普洱茶所具有的氧化产物及品质特 普洱茶主要产于云南省澜沧江下游的思茅和西 征与红茶完全不同L4]。 双版纳等地州,其特殊的加工工艺使茶叶中对人体 红茶由于其加工过程中形成的多酚类氧化产物 有益的物质充分转化,形成了普洱茶优异的品质基 一茶黄素、茶红素等,使其具有较强的自由基清除和 础,使得它的保健功效得以体现Ll ]。 抑制脂质氧化等生物活性[5 ]。现也有研究表明,普 普洱茶与红茶均属于“发酵茶”,因在其加工过 洱茶提取物具有清除自由基,抑制巨噬细胞中脂多 程中,茶叶中的多酚类物质经“发酵”过程而氧化,但 糖诱导产生NO及抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化等 由于两者“发酵”方式及条件不同,选用的原料不同, 明显的抗氧化活性L7 ]。 所产生的结果也必然不同。在红茶的“发酵”过程中, 本研究对普洱茶和红茶的各主要成分进行萃 茶树鲜叶中多酚类物质的氧化是依靠多酚氧化酶 取,通过普洱茶与红茶萃取组分在水相、脂相体系中 (PPO)及过氧化物酶(PoD)的酶促作用而完成L3], 抗氧化能力比较,分析与初步确定具有抗氧化功效 而普洱茶在此过程中多酚类的氧化主要依靠湿热作 的某些活性成分,全面评价普洱茶作为特殊后发酵 用完成。因加工普洱茶的原料不是茶鲜叶而是“青毛 茶类的抗氧化活性,揭示不同发酵工艺所产生活性 茶”(绿茶),而在“青毛茶”的“杀青”过程中酶活性已 成分功效的差异性,为我国后发酵茶的保健作用机 收稿日期:2OO6一O4一O7修改稿收稿日期:2OO6一O4—26 作者简介:东方,女(1982年一)。河南驻马店人。浙江大学茶学系研究生。从事茶叶生物化学与综合利用研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com

第4期 东 方等 普洱茶与红茶的抗氧化特性比较研究 203 理提供一定的理论依据。 2材料与方法 2.1试剂与仪器 普洱茶与红茶的水提物(购自龙游茗皇天然食 品开发有限公司),鲁米诺(Luminol,购自Sigma公 司),其余试剂均为国产A.R级。 所用仪器有PHS一2ST数显酸度计(上海天达仪 器有限公司);数显恒温水浴锅(国华电器有限公 司);电子天平AE200(梅特勒一托利多仪器有限公 司);化学发光仪Luamt LB 9507(德国EG8LG Berthold);721E可见分光光度计(上海光谱仪器有 限公司)。 2 2试验方法 2.2.1普洱茶与红茶水提物的各萃取组分制取 取40 g普洱茶粉(或红茶)用蒸馏水1:1O(质量比) 配成溶液。倒入分液漏斗中,分别用等体积的氯仿、 乙酸乙酯,正丁醇各萃取3次,每次萃取2 h左右。乙 酸乙酯萃取后所得乙酸乙酯层用碳酸氢钠洗涤,洗 涤后所得分别为酯层(EAF,红茶为BEAF,普洱茶 为PEAF)与碱层。正丁醇萃取后得水层加乙醇至最 终浓度为75 9/5,沉淀得到沉淀物与剩余相。正丁醇层 与碱层合并(BF,红茶为BBF,普洱茶为PBF)。将各 萃取层旋转蒸发去除有机溶剂后转溶于水,冷冻干 燥得各萃取组分。具体步骤如图1。 普洱茶(或红茶)水提物 次 氯仿层 水层 次 乙酸乙醇层 水层 一次 酯层 碱层 水层 正丁醇层 沉淀 余相 图1茶粉各萃取层组分提取示意图 Fig.1 The flow chart of the extracting process for tea 2.2.2羟自由基清除能力测定利用鲁米诺化学发 光法测定[J 。反应体系为800 l,分别加入200 l待 测物(O.05 g/1)、200 l鲁米诺(2.5×10叫mol/1)、 200 l硫酸铜(7×10 mol/1)和200 l 0.9 双氧 水。充分混匀后,立即用化学发光仪测定发光值,每隔 4 S记录一次数据,得动态曲线。 2.2.3过氧化值(PoV)的测定油脂在自然情况 下被缓慢氧化,生成过氧化物。KI是一种较强的还 原物,被过氧化物氧化后得单质碘,加入淀粉溶液显 色,其在585 rim下有吸收峰。利用这一性质可在分 光光度计下测吸光度值。根据所测得的吸光度值可 得被氧化所得碘的量,从而推算出油样的氧化性也 即待测物的抗氧化性。如待测物抗氧化性强则在相 同的条件下油样所产生的过氧化物就少,到最后所 测吸光度值也就小[1¨。 分别称量上述提取物0.05 g。先用1 ml蒸馏水 溶解后加0.4 ml吐温一20,然后加1O ml油,摇匀后 放置摇床上。每隔2天测一次吸光度值。测量时取油 样600 l,然后加氯仿一冰醋酸(40:60 V/V)溶解, 加5 ml KI溶液,稀释,最后加1 ml淀粉溶液并定容 至50 ml。稳定后取上清液在585 rim下测量吸光度 值,计算确定其过氧化值(I 值)。故与参比组比较, POV EI2‘样品)/I2(参比)×1003越小,则样品的抗氧化 能力越强L1引。 3结果与分析 3.1各萃取组分的得率 比较这两类茶的萃取组分可以得知,氯仿提取 物在普洱茶中所占的比率约为红茶的两倍(表1),可 推测普洱茶可能含有较多量的咖啡碱类物质;EAF 在两类茶中都占了较少一部分,可能多酚类物质在 两类茶中含量较少;BF提取物在两类茶中占的比率 很大;沉淀在普洱茶中占了将近一半,我们推测其可 能为多糖类物质,它的存在可能影响整个水提物的 生物活性,这个问题有待今后的研究证实。剩余相是 一类很复杂的物质,可能包括游离单糖,氨基酸及其 他一些未知成分等。 表1各萃取组分得率( ) Table 1 The contents of individual fractions( ) 3.2对羟自由基的清除效果 维普资讯 http://www.cqvip.com

204 茶 叶 32卷 一n1g∞ua。器c.;量.【 ∞6毯嘿 一n1 ∞ua。器 .;量.【I硼∞6毯嘿 扑 利用鲁米诺一过氧化氢一铜为发光体系测待测物 的抗氧化性。加入待测物后,测定的化学发光强度越 弱,则表明清除羟自由基能力越强。由图2可知,普洱 茶水提物与红茶水提物均对羟自由基具有明显的清 除作用,红茶的清除能力略强于普洱茶(P<0.O1)。 普洱茶各萃取组分中,PBF无清除羟自由基能力且 起一定的促氧化作用,PEAF具有较强的清除能力且 强于普洱茶水提物(P<0.O1)(图3)。红茶各萃取组 分中,BBF和BEAF均具有较强的清除能力,清除能 力强弱依次为BEAF ̄Black tea>BBF(P<0.01) (图4)。比较两茶类的EAF的化学发光强度得知, BEAF的清除能力略强于PEAF(P<0.05)(图5)。 一rI1一rI 一∞ ∞。器 .;量.【 ∞6世曛 扑 2 2 I l  一5 O 5 O 5 5 O O O O O O O O O O O O O O O O O O O 时间Time(s) 图2普洱茶粉与红茶粉对羟自由基的清除作用 Fig.2 The scavenging effect of pu—erh tea and black tea on hydroxyl radicals (CK:对照;Pu—erh tea:普洱茶粉;Black tea:红茶粉;数据为 Mean士S.E。n一5) 时间Time(s) 图3普洱茶及其萃取组分对羟自由基的清除作用 Fig.3 The scavenging effect of pu—erh tea and individual fractions on hydroxyl radicals (数据为Mean士S.E,n一5) 3.3对猪油和大豆油的抗氧化作用 普洱茶、红茶及其萃取组分加入油样中,比较其 过氧化值的变化。猪油中,除PEAF,BEAF外,其余 各组分的POV值均低于参比组且有显著性的差异 o 4 8 12 16 2O 24 28 32 36 时间Time(s) 图4红茶及其萃取组分对羟自由基的清除作用 Fig.4 The scavenging effect of black tea and individual fractions on hydroxyl radicals (数据为Mean士S.E,n=5) a。器c.;量.【I叫∞6毯嘿 扑 图5 PEAF和BEAF对羟自由基的清除作用 Fig.5 The scavenging effect of PEAF and BEAF from each tea on hydroxyl. radicals (数据为Mean士S.E,n一5) (P<0.05)(图6),表明普洱茶的水提物及PBF、红 茶水提物及BBF在猪油中有一定的抗氧化能力,两 类茶的EAF均无明显抗氧化能力。大豆油中,尽管 各组分的POV值均略低于参比,但经统计分析,仅 PBF与参比组有显著性差异(P<0.05)(图7),表明 其在大豆油中有一定的抗氧化性。 4讨论与小结 普洱茶的羟自由基清除能力无论在总体或相对 应的单个组分(预备试验表明氯仿层、沉淀及剩余相 均无抗氧化活性,故在本文不作探讨)上均略低于红 茶;普洱茶经过渥堆后多酚物质大部分已被氧化,其 多酚类组成已不同于红茶且含量明显低于红 茶[1。 引,而自由基清除能力与多酚类物质组成及含 量具有一定的相关性,这可能导致普洱茶水提物本 身及酯层清除羟自由基能力均略低于红茶。关于茶 叶中多酚类抗氧化机理的研究过去多集中在非氧化 多酚类和儿茶素单体上,但自从发现葡萄籽提取物 2I一∞u维普资讯 http://www.cqvip.com

第4期 东 方等 普洱茶与红茶的抗氧化特性比较研究 205 110 l00 90 掌 80 0 a’70 60 50 40 4 6 8 l0 时间Time(d) 图6提取物在猪油中的抗氧化性 Fig.6 Effect of tea extracts and its fractions on POV value in lard 图7提取物在大豆油中的抗氧化性 Fig.7 Effect of tea extracts and its fractions on POV value in soybean oil 一原花青素卓越的抗氧化作用后,对儿茶素寡聚体 的研究引起了科学家的关注。普洱茶中可能存在特 异多酚类物质(如儿茶素的寡聚体等),但目前国内 外对这方面的研究尚处空白,因此,有必要从化学组 成和结构及抗氧化机理等方面对其进行研究。另有 大量的研究报道证实茶色素具有较强的清除自由基 能力[6 “”],普洱茶中仅含有少量的茶红素(TR)且 不含茶黄素及茶黄酸(TFA),而红茶在加工过程中 由于酶促作用保留了一定量的TF,TFA及其TRL4J, 可能使得BBF具有较强的清除能力,而PBF则表现 出促氧化效果可能是由于剂量效应L1 或一些未知 物所致,有待于进一步研究。 在油脂抗氧化实验中,普洱茶及红茶水提物在 猪油中的抗氧化性优于在大豆油中,从脂肪酸组成 看,猪油的饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的比例高于 大豆油,因此猪油显得相对不容易被氧化。两类茶的 EAF均无明显的抗氧化作用,这可能是多酚较强的 水溶性妨碍了它在脂溶性体系中充分发挥作用L1引。 PBF无论在猪油还是大豆油中均表现明显的抗氧 化性,我们推测可能是其中的未知物在脂相中能发 挥良好的抗氧化作用,这有待于进一步的研究证实。 由此可以看出,在不同的体系和环境中,各影响 因素的重点不同,相同的物质会表现出抗氧化、促氧 化或失效。抗氧化剂在不同的体系中抗氧化性的强 弱也不同。因此须采用不同的抗氧化作用机理的方 法结合在不同的条件环境下测定,才能全面评价待 测物的抗氧化活性。以上结果表明,水相中普洱茶显 示较强的抗氧化性,起主要作用的是乙酸乙酯萃取 组分,但在油相中,该萃取组分几乎没有抗氧化作 用,相反,正丁醇萃取组分显示一定的抗氧化作用。 参考文献 1陈兴琰.茶树原产地一云南.昆明:云南人民出版社,1994:132 2 赵龙飞,周红杰.云南普洱茶渥堆过程叶中微生物初探.云南茶 叶,2003,4:13 3 Roberts EAH.Phenolics of manufactured tea-orl’gin as enzymicoxidation products in fermention.J Sci Food Agri,1 958, 9:212—216 4邵宛芳,M.N Clifford,C.Powel1.红茶及普洱茶主要成份差异的 初步研究.云南农业大学学报,1995,10(4):285—292 5 Luczaj W,Skrzydlewska E.Antioxidative properties of black tea. Preventive Medicine,2005,40:910—918 6于海宁,沈生荣.茶黄素类抗氧化及抗肿瘤作用的研究进展.茶 叶,2001,27(3):7--11 7 Lu CH,Hwang LS.Safety,biological activity and the active components of Pu—er tea[c].International Tea symposium, 2005:272—279 8 Duh PD。Yen GC,Yen WJ,Wang BS,Chang LW.Effects of Pu- erh tea on oxidative damage and nitric oxide scavenging.J Agric Food Chem,2004,52:8169—8176 9揭国良,何普明,丁仁凤.普洱茶抗氧化特性的初步研究.茶叶, 2005。31(3):162—165 10李明静,王金中,刘绣华.鲁米诺一过氧化氢一铜(I)化学发光法 测定儿茶素.分析化学,2001,29:613 11 江秀明,周长智,李建伟,等.可见分光光度法测定食用油过氧化 值.郑州粮食学院学报,1999,20(2):55—57 12陈薇,王恒山,黄世稳,等.大叶苦丁茶抗氧化成分及抗氧化性 能研究(I).广西植物,2002,22(5):463—466 13龚淑英,周树红.普洱茶贮藏过程中主要化学成分含量及感官品 质变化的研究.茶叶科学,2002,22(1):51—56 14罗龙新,吴小崇,邓余良,等.云南普洱茶渥堆过程中生化成分的 变化及其与品质形成的关系.茶叶科学,1998。18(1):53—60 15 吕海鹏.普洱茶的化学成分分析及其抗氧化活性的研究[D].中 国农业科学院硕士学位论文,2005 16宛晓春,李大祥,等.茶色素及其药理学功能.天然产物研究和开 发.2001,13(4):65—70 17 Rice—Evans CA,Miller NJ,Bolwell PG,Bramley PM,Fridham JB.The relative anti—oxidant activities of plant—derived polyphenolic flavonoids.Free Radical Research,1995,22:373— 388 18杨贤强,王岳飞,陈留记,等.茶多酚化学[M].上海:上海科学技 术出版社,2003:159—165,426—455 

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