超声法与药典冷浸法测定中药饮片浸出物的实验研究

Doi：10．13621/j．1001－5949．2019．09．0821

·临床研究·

超声法与药典冷浸法测定中药饮片浸出物的实验研究

田

［摘要］目的

杰，白玉婷，王艳平

对在中药饮片验收检验中所涉及的临床常用中药饮片川牛膝、红花、连翘、蛇床子、青蒿、银柴

采用单因素、正交试验方法筛选超声提取法测定川牛膝

白头翁、瓜蒌子采用冷浸法与超声提取法测定其浸出物的实验结果进行比较，探索超声提取法测定浸出物在中胡、

探究超声提取的影响因素。方法药饮片检验中的应用，

饮片浸出物的结果进行对比分析。结果

浸出物替代药典冷浸法测定川牛膝浸出物的条件；应用SPSS17．0统计软件对冷浸法和超声法测定上述8种中药

筛选出超声提取法的最优条件是超声频次40MHz，浸泡30min，超声80

川牛膝、红花、连

min，该条件下测定的浸出物与药典冷浸法测定的浸出物差异无统计学意义（P＞0．05）。结论

瓜蒌子超声提取法可替代药典冷浸法测定浸出物，蛇床子、青蒿、银柴胡、白头翁超声提取法不可替代药典冷浸翘、

耗时少的优点，但采用超声法测定中药饮片浸出物，必须经过试验验证与药典规定的冷法。超声法具有操作简便、

浸法测定无异后才能在临床检测中应用。

［关键词］浸出物；超声提取法；药典冷浸法［中图分类号］Ｒ927．2

［文献标识码］A

AnexperimentalstudyonthedeterminationofextractsfromChineseherbaldecoctionpiecesbyultrasound

andcoldimmersioninpharmacopoeia

TIANJie，BAIYuting，WANGYanping．ChineseMedicineHospitalandChineseMedicineＲesearchInstituteofNingxiaHuiAutono-mousＲegion，Yinchuan750021，China

Email：wypnx．cool@163．comCorrespondingauthor：WANGYanping，［Abstract］Objective

Tocomparetheresultsofcoldimmersionmethodandultrasonicextractionmethodfordeterminationof

extracts，andtoexploretheapplicationofultrasonicextractionmethodinpractice，andtoexploretheinfluencingfactorsofultrasonicex-Chuanniuxi，Honghua，Lianqiao，Gualouzi，Shechuangzi，Qinghao，YinchaihuandBaitouwengwhichcommonlytraction．Inthisstdudy，

usedtraditionalChinesemedicinedecoctionpiecesweredetected．Methods

Singlefactorandorthogonaltestwereusedtoscreenthe

conditionsforthedeterminationofextractsbyultrasonicextractioninsteadofcoldleachinginpharmacopoeia．SPSS－17statisticalsoft-warewasusedtoanalyzetheresultsofcoldimmersionandultrasonographyforextractsofChuanniuxi，Honghua，Lianqiao，Gualouzi，She-Qinghao，YinchaihuandBaitouweng．Ｒesultschuangzi，

Theoptimalconditionsscreenedwere40MHzultrasoundfrequency，30minutes

Ultrasoundextractionof

80minutesultrasonic，andtherewasnosignificantdifferencebetweentheextractsmeasuredundertheoptimalconditionandimmersion，

theextractsdeterminedbythecoldimmersionmethodprescribedinpharmacopoeia（P＞0．05）．Conclusion

Honghua，LianqiaoandGualouzicanreplacecoldimmersionmethodinpharmacopoeia，whileultrasoundextractionofShe-Chuanniuxi，

chuangzi，Qinghao，Yinchaihu，andBaitouwengisnotasubstituteforcoldimmersionmethodinpharmacopoeia．Ultrasonicmethodhastheultrasoundmethodforthedeterminationofextractsfromdecoctionadvantagesofsimpleoperationandlesstime－consuming．However，

piecesoftraditionalChinesemedicinesmustbeverifiedbyexperimentsbeforeitcanbeusedinclinicaldetection．

［Keywords］Extract；Ultrasonicextraction；ColdimmersionmethodprescribedinPharmacopoeia

浸出物测定法是以药材浸出物的含量作为其质

一般可根据已知成分的溶解性质选量标准的测定，

乙醇或乙醚等溶剂对药材可溶性物质进行测用水、

用以控制中药的质量，是中药饮片质量控制的一定，

包括水溶性浸出物测定种重要方法。测定方法醇溶性浸出物测定法、挥发性醚浸出物测定法。法、

［基金项目］2016年宁夏高等教育科学研究项目（NGY2016107）；

2014年中药特色技术传承人才培训项目（国中医药办

2014］39号）人教发［

［作者单位］宁夏回族自治区中医医院暨中医研究院，宁夏银

川750021

［通讯作者］王艳平，Email：wypnx．cool@163．com。

［1－2］

水溶性浸出物测定法分为冷浸法和热浸法两种，冷浸法主要用于含挥发油多或受热溶液易变色的中

实际检测方法用时长，饮片的待检时间过长，就药，

会影响到饮片的入库及临床使用。故采用超声法测

与药典冷浸法进行比较，确定用超定饮片的浸出物，

声法测定饮片浸出物替代冷浸法测定饮片浸出物的

可行性。11．1

资料与方法

一般资料：仪器包括FA2104电子天平（万分

Cascada．上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、之一，

ＲH－Q全温摇床III．I纯水机（美国颇尔有限公司）、

·822·宁夏医学杂志2019年9月第41卷第9期NingxiaMedJ，Sep．2019，Vol41，No．9

（常州华冠仪器制造有限公司）、GZX－DH．300－BS

－II电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂）、KQ－500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。试药包括95%乙醇（20170806，

徐州天鸿化工有限公司）；无水乙醇（20171010，

徐州天鸿化工有限公司）；正丁醇（20151008，

徐州天鸿化工有限公司）；甲醇（20171010，

徐州天鸿化工有限公司）；石油醚60～90℃（20161209，

徐州天鸿化工有限公司）；超纯水（自制）；连翘（161201，160401，陕西，安徽汇中州中药饮片有限公司），

连翘（1607123，山西，宁夏明德中药饮片有限公司）；川牛膝（160901，

四川，安徽汇中州中药饮片有限公司），

川牛膝（1701059，1609038，四川，宁夏明德中药饮片有限公司），川牛

膝（161201，

陕西，安徽汇中州中药饮片有限公司）；红花（1601036，1602026，1702138，，宁夏明德中

药饮片有限公司）；银柴胡（1711087，

1504068，宁夏明德中药饮片有限公司），

银柴胡（150301，内蒙古，安徽汇中州中药饮片有限公司）；蛇床子［1708029，1607003，160401，河北，宁夏明德中药饮片有限公司（前两个批号），安徽汇中州中药饮片有限公司］

。1．2方法1．2．1

采用正交试验法考察超声法测定浸出物的

实验条件：以川牛膝为例，

取供试品粉碎，使之能通过二号筛，

并混合均匀，精密称定供试品约4g，溶剂为水，

使用超声法测定浸出物，通过浸泡时间、超声时间、

超声频次单因素的预实验，考察实验最佳条件。三因素实验水平见表1，实验结果见表2，方差分析见表3。

表1

正交试验超声法测定浸出物含量

水平A浸泡时间（min）B超声时间（min）C超声频次（HMz）10604023070603608080表2

正交试验超声法测定浸出物实验结果

试验号因素ABCD（空白）浸出物（%）1111159．19522122258．75523133360．11694212359．10945223158．08496231259．29257313258．51748321355．17519332158．87K159．35658．94157．88858．723K258．82957．33858．91858．855K357．52759．43358．90658．134Ｒ1．8292．0951．030．721表3

正交试验超声法测定浸出物方差分析因素偏差平方和自由度F比F临界值P值A浸泡时间（min）5．31426．00519＞0．05B超声时间（min）7．19728．13219＞0．05C超声频次（HMz）2．10022．37319＞0．05误差0．2根据表2分析，三种因素对实验结果的影响大

小排序为：超声时间＞浸泡时间＞超声频次，其中超声时间对实验结果的影响最大。但表3方差分析显

示，各因素无显著性差异。1．2．2

与药典冷浸法实验结果对比确定最佳实验

条件：同样以川牛膝为例，

川牛膝正交试验采用超声法测定浸出物的9组数值与药典法测定浸出物的数

值进行t检验，

结果见表4。结果表明，该超声条件测定的浸出物可替代药典冷浸法测定的浸出物，

而且实验6组最接近药典冷浸法测定的浸出物，因此选定超声最佳条件是超声频次40MHz，

浸泡30min，超声80min，纯化方法采用过滤。

表4川牛膝正交试验超声法浸出物测定与药典冷浸法浸出物测定比较（%，

x珋±s）测定方法浸出物（%）药典冷浸法59．6593±0．2225超声法组159．1950±0．6673组258．7552±0．2204*组360．1169±0．5919组459．1094±0．5119组558．0849±0．4160*组659．2925±0．82组758．5174±0．3127*组855．1751±0．9352*组958．87±0．3342注：*

与药典冷浸法比较，P＜0．05，表明该超声条件测定的浸出物不可替代药典冷浸法测定的浸出物。1．2．3

超声法与冷浸法的对比：取8种中药饮片，

分别使用药典冷浸法和超声法进行浸出物检测。1．2．3．1

药典冷浸法：取供试品约4g，精密称定，

置250～300mL的锥形瓶中，精密加表中饮片所对

应的溶剂100mL，

密塞，冷浸，前6h内时时振摇，后静止18h，

用干燥的滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，

于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。除另有规定外，

以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）［1］

。

宁夏医学杂志2019年9月第41卷第9期NingxiaMedJ，Sep．2019，Vol41，No．9·823·

1．2．3．2

超声法：取供试品约4g，精密称定，置250

～300mL的锥形瓶中，精密加表中饮片所对应的溶速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供

试品中水溶性浸出物的含量（%）。2

结果

实验结果显示，川牛膝、红花、连翘、瓜蒌子可采

蛇床子、青蒿、银柴胡、白头翁用超声法测定浸出物，

见表5。不可采用超声法测定浸出物，

超声法测定结果（%）58．6937±0．244037．6300±0．227115．7418±0．072712．47±0．19592．6307±0．024626．6304±0．058015．2209±0．29874．6391±0．0991P值＞0．05＞0．05＞0．05＜0．05＜0．05＜0．05＜0．05＞0．05测定方法可替代（是/否）是是是否否否否是密塞，冷浸30min，超声频率为40MHz，剂100mL，

超声80min，用干燥的滤器迅速滤过，精密量取续滤置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸液20mL，

于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅干后，

表5

品种川牛膝红花连翘蛇床子青蒿银柴胡白头翁瓜蒌子提取所用的溶剂水水65%乙醇95%乙醇无水乙醇甲醇水饱和正丁醇石油醚（60～90℃）药典冷浸法测定结果（%）58．6951±0．187537．6562±0．138815．6962±0．0513．9308±0．19392．9725±0．012433．0349±0．016920．2183±0．04294．5217±0．0856超声法替代药典冷浸法测定浸出物的饮片研究

3

讨论

2015年版《中华人民共和国药典》将浸出物测

冷浸法主要用于含定法分为冷浸法和热浸法两种，

挥发油多或受热溶液易变色的中药。实际检测时由

影响饮片的验收时间，故本研究采用操于耗时过长，

果并没有遵守这一规律。这也提示我们，考察超声

首先法测定浸出物的方法是否可代替药典冷浸法，需对超声条件进行筛选并确定最优超声条件

［3－6］

，

并将超声法测定的浸出物与药典法测定的浸出物进

根据t检验结果来确定超声法是否能替代行t检验，药典冷浸法。

［参考文献］

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典四部［S］．北京：中国医

2015：202．药科技出版社，

［2］张思思．纹党参鲜药材产地加工炮制一体化技术研究［D］．兰

2016．州：兰州大学，

［3］陈光宇，何群，何永恒．延胡索醇回流法与超声法提取工艺比较

2013，29（5）：420－423．研究［J］．药学学报，

［4］卢静华，刘元媛．连翘中连翘苷超声法提取工艺的研究［J］．辽

2011，32（1）：68－70．宁医学院学报，

［5］石恩慧，李红，谷明灿，等．响应面法优化超声提取板栗总苞多

2013，13（5）：69－76．酚工艺条件［J］．中国食品学报，

［6］谢诲，熊丽，肖英华，等．超声提取法与冷浸法测定中草药浸出

2001，12（8）：684．物的结果比较［J］．时珍国医国药，

并与作简便且耗时短的超声法测定饮片的浸出物，

考察超声法测定饮片浸出物的方药典法进行比较，

红花、连法是否可代替药典法。本研究发现川牛膝、

并探索翘以及瓜萎子的浸出物可使用超声法测定，为这四种药物浸出物的出超声法的最佳提取条件，

检测提供了新的快速有效的方法。

本研究对川牛膝与连翘进行了超声提取法的实

经考察发现两种药物超声法提取的最验条件筛选，

均为超声频次40MHz，浸泡30佳实验条件相同，

min，超声80min。将该超声条件用于川牛膝、红花、连翘、蛇床子、青蒿、银柴胡、白头翁、瓜蒌子中药饮发现该方法对水溶性及醇浓度片的浸出物的测定，

但不适用于提取溶剂极低于65%的溶剂是适用的，

然而瓜蒌子的测定结性小于上述两种溶剂的检测，

［2018－08－29收稿日期］［责任编辑］马兴忠