鸦胆子油乳注射液无菌检查方法适用性试验

Technological progress科技进展I鸦胆子油乳注射液无菌检查方法适用性试验■ 文／陈应林　陈　静摘要：目的：建立鸦胆子油乳注射液的无菌检查法。方法：依据《中国药典》（2015年版）四部通则1101无菌检查法薄膜过滤法对鸦胆子油乳注射液进行无菌检查方法研究。结果：采用EVS301集菌培养器，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为冲洗液的薄膜过滤法，便于结果观察。结论：方法适用性试验结果表明，该方法可用于鸦胆子油乳注射液的无菌检测，能够保证结果准确可靠。关键词：鸦胆子油乳注射液；无菌检查；薄膜过滤法；方法适用性试验文章编号：2096-4137（2018）03-021-03 DOI：10.13535/j.cnki.10-1507/n.2018.03.06《中国药典》（2015年版）规定，进行产品无菌检查时应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。鸦胆子油乳注射液为抗肺癌、肺癌脑转移及消化道肿瘤药，该产品为鸦胆子油经精制豆磷脂乳化所得的水包油型乳剂。为了确保临床用药安全，需对其进行无菌检查。本文用薄膜过滤法对3批鸦胆子油乳注射液进行无菌检查方法适用性试验，确保了鸦胆子油乳注射液无菌检查的检验条件和方法。1.2　方法适用性试验用菌株金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]；大肠埃希菌[CMCC（B）44102]；枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]；生孢梭菌[CMCC（B）941]；白色念珠菌[CMCC（F）98001]；黑曲霉[CMCC（F）98003]（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌菌种均从中国食品药品检定研究院购买0代冻干粉；黑曲霉菌种从广东环凯微生物科技有限公司购买0代冻干粉；江苏九旭药业有限公司生测室岗位人员将0代冻干粉复溶后，自行制备斜面；其中金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌为第三代；生孢梭菌、白色念珠菌为第二代；黑曲霉为）。1.3　培养基及冲洗液硫乙醇酸盐流体培养基（批号：150605）、胰酪大豆胨液体培养基（批号：1701182）、胰酪大豆胨琼脂培养基（批号：1704142）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（批号：170509）、沙氏葡萄糖液体培养基（批号：150914）、pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（批号：160801），以上培养基均来源于北京三药科技开发有限公司。1.4　试药鸦胆子油乳注射液（规格：20mL，批号分别是20170708、20170709、20170710），由江苏九旭药业有限公司生产。中国高新科技 2018年第3期1　验证材料1.1　仪器HTY-602集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司），一次性全封闭集菌培养器（EVS301，杭州泰林生物技术设备有限公司），GHP-9270隔水式恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司），LRH-250F生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司），MJ-250-II霉菌培养箱（上海一恒科学仪器有限公司），YG-0.25脉动真空灭菌柜（江苏神农灭菌设备有限公司），DHG-9146A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），SW-CJ-2FD双人单面超净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司），BSC-1300IIA2生物安全柜（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）。·21·2上发网站2.indd 212018/2/26 16:44:40I科Technological progress技进展2　方法与结果滤至尽；pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液500mL（1操作应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无瓶）按不少于3次平均分配进行冲洗，冲洗完成后，菌检查的要求。应在B级背景下的A级单向流洁净区灌注硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养域中进行。基，吸取上述制备好的菌液1mL分别接种至各自培养2.1　菌液制备基中。（1）金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃2.2.2　供试品对照组希菌的斜面培养物接种至胰酪大豆胨液体培养基中，方法同试验组，但不加各试验菌液。30℃～35℃培养18～24h；取上述培养物用0.9%无菌2.2.3　阴性对照组氯化钠溶液制成小于100CFU/mL的菌悬液。冲洗方法同试验组，但不加供试品。（2）生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养物，取其培将上述培养基置于规定温度下培养，供试品对照养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成小于100CFU/mL的菌组和阴性对照组培养14d，试验组培养3～5d，并逐日悬液。观察。试验结果见表1和2。（3）白色念珠菌斜面接种至沙氏葡萄糖琼脂培供试品对照组和阴性对照组14d逐日观察均为阴性。养基中，20℃～25℃培养24～48h，取其培养物用表1　方法适用性试验用菌液的稀释级别及菌落数0.9%无菌氯化钠溶液制成小于100CFU/mL的菌悬液。菌种名称1皿2皿平均值稀释级别（4）取20℃～25℃培养5～7d的黑曲霉的斜面，加金黄色葡萄球菌959092.510-73～5mL含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化生孢梭菌222724.510-4钠溶液，将孢子洗脱制成小于100CFU/mL的孢子悬液。大肠埃希菌919010-7（5）菌液计数。分别取上述4种适宜稀释级别枯草芽孢杆菌394240.510-5的细菌菌液1mL加入培养皿，每种菌液做平行2皿，黑曲霉菌535654.510-6注入胰酪大豆胨琼脂培养基，置30℃～35℃培养48h白色念珠菌58565710-6计数，其中生孢梭菌放置厌氧罐培养。分别取上述2种适宜稀释级别的真菌菌液1mL加入培养皿，每种表2　方法适用性试验结果菌液做平行2皿，注入沙氏葡萄糖琼脂培养基，置硫乙醇酸盐流体培养基20℃～25℃培养72h计数。 培养时间第一天第二天第三天菌种名称2.2　方法适用性试验金黄色葡萄球菌试验组++++++2.2.1　试验组大肠埃希菌试验组按照《中国药典》2015年版四部通则1101无菌检++++++生孢梭菌试验组查薄膜过滤法进行过滤，取每批供试品30支，即抽取++++++20mL/支供试品注入培养器内，全部供试品抽取后，胰酪大豆胨液体培养基抽取少量冲洗液冲洗管路，然后将滤器中的样品过培养时间菌种名称第一天第二天第三天第四天第五天枯草芽孢杆菌试验组-++++++++++白色念珠菌试验组-++++++++++黑曲霉试验组-++++++++++注：“+”代表阳性，“-”代表阴性。2.3　结果经过3次平行试验，采用薄膜过滤法，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为冲洗液，即抽取20mL/支供试品注入培养器内，全部供试品抽取后，抽取少量冲洗液冲洗管路，然后将滤器中的样品过滤至尽；pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液500mL（1瓶）按不·22·中国高新科技 2018年第3期2上发网站2.indd 222018/2/26 16:44:40Technological progress科技进展I摘要：文章所介绍的试验以干面条白度为指标，探讨了抗氧化剂不同添加量对干面条褐变的影响。结果表明，添加抗氧化剂D-异抗坏血酸0.03%，抗坏血酸0.04%，植酸0.04%，柠檬酸0.04%是干面条防褐变最佳的工艺条件。此试验为抗氧化剂在干面条中的应用提供了理论依据。关键词：抗氧化剂；干面条；褐变文章编号：2096-4137（2018）03-023-03 DOI：10.13535/j.cnki.10-1507/n.2018.03.07■ 文／张　抗　王敬臣　李月番抗氧化剂对干面条褐变的影响鉴于干面条在存放过程中很容易发生褐变，而抗1　材料与方法氧化剂可以有效抑制褐变发生，本试验就抗氧化剂对1.1　材料与试剂干面条褐变的影响进行了研究，采用添加多种抗氧化面粉（一加一天然面粉有限公司），D-异抗坏血剂进行对比分析，确定干面条添加抗氧化剂防褐变最酸（郑州拓洋实业有限公司），抗坏血酸（郑州拓洋佳添加量，为干面条添加抗氧化剂防褐变应用提供理实业有限公司），植酸（天津市化学试剂三厂，分析论依据，可以有效指导面条企业进行干面条添加抗氧纯），柠檬酸（天津红岩化学试剂厂，分析纯），碳化剂防褐变的工业化应用，有利于延长干面条的保质酸氢钠（天津红岩化学试剂厂，分析纯），食盐，食期，具有重要的实际意义。用碱。少于3次尽量平均分配进行冲洗，各试验菌均在规定pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、pH7.0无菌氯化钠-时间内长势良好，并与菌液组中相应的菌落生长情况蛋白胨缓冲液（含0.1%吐温80）作为冲洗液，在压滤一致，供试品对照组和阴性对照组均无菌落生长，故冲洗上没有明显异常，依据操作人员的反馈及可操作可采用薄膜过滤法用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液性，并结合培养观察结果的准确性，最终采用pH7.0作为冲洗液对鸦胆子油乳注射液进行无菌检查。无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为冲洗液，确定冲洗液及集菌器型号后，批检验时间缩短至30分钟以内。3　讨论综上，该方法适用性试验表面薄膜过滤法可以快3.1　关于集菌培养器的选择速、准确地用于鸦胆子油乳注射液的无菌检验。本品为水包油型乳剂，初步试验时采用了APY330及其改进型集菌培养器，但是样品抽滤至一半时就出参考文献现压滤甚慢或集菌培养器红色盖帽蹦出（集菌培养器内部压力太大）的现象，导致批检验过程长达1.5h，[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典[M]．北京：中国效率低下且染菌风险增加，过滤后也会出现滤膜变形医药科技出版社，2015.[2]国家药典委员会．中国药典分析检测技术指南[M].中国等现象，严重影响了检验结果和最终判断的准确性。医药科技出版社，2017.经集菌培养器生产厂家和我公司反复试验，最后确定[3]宋萍，章燕君，何萍，等．鸦胆子油乳注射液的临床药选用EVS301型集菌培养器。物利用研究[J]．中国医药指南，2013，11（27）.3.2　关于冲洗液（作者陈应林系浙江九旭药业有限公司高级工程师）确定采用EVS301集菌培养器后，选用了0.1%蛋白胨水溶液、0.1%蛋白胨水溶液（含0.1%吐温80）、中国高新科技 2018年第3期·23·2上发网站2.indd 232018/2/26 16:44:40